Effettuare una taratura standard per HPLC

Quando si lavora con cromatografia liquida (HPLC), una buona taratura è assolutamente essenziale per garantire risultati affidabili e di qualità. calibrazione corretto dei HPLC inizia con fare una calibrazione corretta. Nella maggior parte dei casi, la calibrazione effettivamente richiede una serie di modelli di concentrazione crescente per produrre ciò che è noto come una curva di calibrazione. Questa è una linea incisa e un'equazione associata che descrive la relazione tra la concentrazione della sostanza da testare e l'HPLC risposta del rivelatore.

istruzione

    Istruzioni per calibrare un HPLC

  • 1

    Determina la sostanza chimica che si desidera provare a utilizzare il HPLC (il "analita"). Ad esempio, si potrebbe desiderare di provare un certo numero di bevande di conoscerne il contenuto di fruttosio, fruttosio nel qual caso sarebbe l'analita.

  • 2

    Ottenere una quantità di analita chimica dei adeguata purezza. In genere la purezza dovrebbe essere superiore al 99% e l'analita deve essere acquistato da una società di fornitura di prodotti chimici di fama. Nel caso di fruttosio, per esempio, che avrebbe dovuto comprare il fruttosio puro da un fornitore di prodotti chimici e non in un negozio di alimentari.

  • 3

    Determina le concentrazioni massime e minime analiti previsti nei campioni si va a provare HPLC. Per le bevande analcoliche, è necessario esaminare le etichette delle bevande e determinare il contenuto di fruttosio dal più basso al più alto tra le bevande vi ensayarás. Si noti che il campione iniziale (la bevanda) può essere diluito o altrimenti manipolare in preparazione per l'analisi (secondo metodo HPLC utilizzato) e quindi la concentrazione di analita in campioni iniettati nella HPLC può essere modificato . Questa è la concentrazione di analita nel campione eseguito su HPLC da considerare.

  • 4

    Determina il solvente in cui l'analita di sciogliere standard di calibrazione. Questo solvente deve essere in grado di sciogliere adeguatamente dell'analita entro una gamma relativamente ampia di concentrazione (almeno alto come campioni desiderati). Inoltre, questo solvente dovrebbe idealmente essere molto simile alla "fase mobile", il solvente utilizzato per trasportare campioni tramite HPLC.

  • 5

    Calcolare la quantità di analita necessaria per fare una "soluzione standard" dell'analita. Questo si trova moltiplicando la concentrazione della soluzione standard per il volume desiderato. La concentrazione dell'analita nella soluzione dovrebbe essere almeno il 10% superiore alla più alta concentrazione del campione fornito. Se il più alto fruttosio sotto una bibita è di 8 g / 100 ml, quindi la soluzione standard potrebbe fare una concentrazione di 10 grammi di fruttosio / 100 ml. Un volume ragionevole è 500 millilitri e 8 / 100mL x 500 mL = occorrerebbero 40 grammi di fruttosio.

  • 6

    Pesare la quantità necessaria di analita precisione. Spesso, un valore di peso in grammi necessario per uno o due decimali è adeguata, ma più precisione può essere richiesto per alcuni metodi.

  • 7

    Trasferire l'analita pesante in una boccetta volumetrica il volume desiderato e aggiunge il solvente desiderato al segno del pallone. Utilizzando un pallone volumetrico (invece di un bicchiere graduato, per esempio) aumenta la precisione del valore della concentrazione della soluzione standard. Assicurarsi che tutti dell'analita viene trasferito al pallone; del solvente utilizzato per il lavaggio, se necessario.

  • 8

    Tappare la beuta ed agitare o invertita finché l'analita è completamente sciolto.

  • 9

    Effettuare una serie di diverse diluizioni della soluzione standard trasferire volume noto di soluzione standard matracci utilizzando pipette di trasferimento preciso, quindi aggiungere il solvente. da analizzare lo standard più bassa concentrazione deve essere al di sotto del campione del campione più basso previsto. Nell'esempio della bibita, se la concentrazione minima prevista di fruttosio in un campione è di 2 grammi / 100 ml, poi uno standard di 1 grammo / 100 mL potrebbe essere fatto. Ciò potrebbe essere fatto attraverso una soluzione standard di diluizione di dieci volte. La serie standard deve includere un totale di 5 o 6 concentrazioni, in modo da diluizioni supplementare per produrre standard forse 3, 5 e 8 grammi di fruttosio / mL sarebbe necessario. Ora avete un certo numero di soluzioni standard in grado di calibrare l'HPLC.

Consigli e avvertenze

  • E 'possibile effettuare tarature standard che contiene più di un analita, se necessario.
  • È un'opzione per filtrare campioni di calibrazione (e soluzioni standard) prima dell'iniezione nella HPLC per rimuovere eventuali particelle fini che potrebbero ostruire lo strumento.
  • Alcuni standard sono facilmente degradati dopo preparano. Assicurarsi che le norme sono cambiate di frequente, se del caso.
  • Come con tutti i processi chimici, mantenere precauzioni appropriate quando si lavora con analiti o solventi potenzialmente pericolosi come quelli che sono tossici o infiammabili.